分子生物 提取DNA后用Nanodrop测浓度与胶图不符，与qubit测的浓度严重不一样我准备用DNA做亚硫酸氢盐的转化，用试剂盒提取全血DNA后跑胶，nanodrop测浓度，结果如下发现问题，E0-2的浓度有500ng/ul, 260吸收峰非常明显。但是胶图上基本没有DNA条带，而条带很亮的E1-4, 浓度只有90ng/ul。我用qubit3.0再测了一次这两个样品，发现都只有10几ng/ul。是因为E0-2降解了吗？如果降解，为什么胶图上看不到弥散的泳道？非常感谢！20160506 消化_副本.jpgQQ截图20160506163527.jpg返回小木虫查看更多 DNA的质量对下步亚硫酸氢盐转化比较重要，我到底按多大浓度来转化？这种浓度转化的效果可以进行下步PCR吗？ 引用回帖:2楼: Originally posted by hxxzhz at 2016-05-06 16:42:51DNA的质量对下步亚硫酸氢盐转化比较重要，我到底按多大浓度来转化？这种浓度转化的效果可以进行下步PCR吗？ 跑电泳的上样量是多少啊？你使用什么方法提取的啊？DNA 严重降解啊，主带几乎没有，只有 smear， 这么淡的条带，再降解就看不见了，哪还有弥散nanodrop，糖类什么的影响极大，情愿信电泳也不信nanodrop条带亮度跟10ng还是挺相符的即使降解，长度也在一两万以上，应该可以继续 引用回帖:3楼: Originally posted by 反应链 at 2016-05-06 19:23:53跑电泳的上样量是多少啊？你使用什么方法提取的啊？DNA 严重降解啊，主带几乎没有，只有 smear。... 2ul , 试剂盒的方法 有的植物用试剂盒提取需要进行改良，比如裂解液需要加大计量，我之前就是用试剂盒提供的方法提取失败了，然后进行改良才成功 各种检测方法原理不同目的不同。电泳的主要目的是看完整性，大概可以估计浓度；Nanodrop测定的是DNA和RNA的吸光值总合，且不管其是否降解都能测到，主要看是否有其他杂质，当确定杂质较少时，计算的浓度可做参考；Qubit使用不同荧光染料只测DNA或RNA或蛋白质，测出的浓度最准确。从你的结果看，没有主峰可能是本身浓度就不高，比值超过2.0，应该是DNA发生降解，有杂质比值不正常时，nanodrop测出的浓度并不可信。 楼主实验室真有钱，没事就用Qubit玩……首先你要确定进行这些测定和跑胶的时候样品是否溶解完全、混合均匀？这很重要！你的胶图跑的太烂，而且这种情况下很难用来估测浓度，如果只说NanoDrop和Qubit, 当然要更相信Qubit的结果了。建议你混匀后再测一次欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。欢迎协助我们监督管理，共同维护互联网健康，违规、侵权举报等事项，请邮件联系 wangxiaodong2@tal.com 处理（点此查看侵权举报方式）我们保证在7个工作日内给予处理和答复，谢谢您的监督。